Иммуноферментный анализ крови



Иммуноферментный анализ крови – это высокоэффективная и современная методика клинической диагностики целого ряда заболеваний. Суть данной методики состоит в выявлении активности определенных антител. ИФА крови используется не только лишь для определения существующих патологий человеческого организма, а и в ходе экспериментальных исследований, где требуется особая точность определения процентных концентраций соединений в биологическом материале.

Принцип диагностики

Иммуноферментный анализ - это выявление специфических антител посредством биохимических реакций. Если человек заболевает, и в его организм попадает чужеродный агент (антиген), то иммунная система начинает активно вырабатывать особые белки или антитела, которые уничтожают антигены. В результате их «столкновения» образуются соединения антиген-антитело.

Именно на их количественный и качественный анализ направлены иммуноферментные исследования. К примеру, если в процессе диагностики нужно выявить конкретный вирус в биоматериале крови пациента, то в нее добавляют антитела, которые считаются специфическими к вирусу.

И наоборот, ИФА реакция на выявление антител заключается во введении в образцы крови определенных антигенов. Особые реагенты ИФА используются в диагностике для того, чтобы сделать биохимическую реакцию более четкой.

Человеческому организму также свойственны неспецифические факторы защиты. Неспецифические антитела - это белки, которые действуют губительно на большое количество вредоносных микроорганизмов. Их не используют при проведении ИФА.

Показания к проведению

ИФА исследование проводят по рекомендации врачей в следующих случаях:

  • Определение патологий инфекционного характера, которые попадают в организм пациента преимущественно половым путем. Точная диагностика инфекций типа уреаплазмоза, трихомониаза или микоплазмоза.
  • Анализ на гормоны в сыворотке крови. Чаще всего анализы определяют тестостерон, прогестерон, тиреотропный гормон, пролактин. Это также относится к диагностике заболеваний органов эндокринной системы.
  • Выявление маркеров онкологического типа.
  • Идентификация различных соединений и установление причины интоксикации человека при укусах змей или отравлениях.
  • Диагностика инфекционных болезней, локализованных в разных органах и системах организма, установление тяжести и стадии патологического процесса. Анализ ИФА определяет такие заболевания, как ВИЧ, вирусные гепатиты всех групп, корь, краснуху, хеликобактерную инфекцию.

Варианты проведения

В современной медицине иммуноферментное исследование применяют в двух вариантах: твердофазном и гистохимическом. Последний вариант используют в диагностике крайне редко. Материалом для исследования в этом случае может быть мазок ИФА, группы клеток, срезы парафиновые или отпечаток диагностируемых органов.

Твердофазный ИФА – это метод анализа, при котором один из участвующих в реакции компонентов (либо антитело, либо антиген) фиксируется на специальном твердом носителе. Это могут быть шарики, микропанели или палочки из полистирола. Данный иммунохимический метод - это гарантия идентификации и обнаружения антигена. Во время диагностики также можно будет выявить характерные антитела и выделить их титр в кровяной сыворотке.

Существует прямой и непрямой способ твердофазного исследования. Для выявления антигенов в лаборатории используют прямой метод, который также имеет название сэндвич метод. Для его осуществления берутся антитела, специфические к выявляемому антигену. Их помещают в лунки микропанели, куда позже вносится и сам антиген. Содержимое нагревают до 37 °С и выдерживают определенное время до самого введения помеченных ферментом антител.

Добавление раствора серной кислоты вызывает химическую реакцию. При положительном результате образцы окрасятся в оранжевый или желтый цвет. Анализ на наличие антител и определение их титра выполняют непрямым твердофазным ИФА.

Виды иммуноглобулинов, которые определяет анализ

Классификация состоит из 5 основных типов иммуноглобулинов человека: IgA, IgG, IgE, IgM и IgD. Для медицины большое практическое значение имеют лишь несколько из них (А, G, М).Иммуноглобулин класса А (или IgA) выполняет функцию защиты от инфекций слизистых, желудочно-кишечного аппарата, мочевыделительной системы и органов дыхания. В начале недуга выявить данные иммунные комплексы не представляется возможным, они проявляют себя только на 2 неделе заболевания или позже.

Иммуноглобулины IgM характеризуют острую фазу патологического процесса в организме. Их можно идентифицировать в крови уже на 5 сутки болезни. Анализ ИФА при беременности в некоторых случаях выдает завышенный показатель IgM, что не всегда является показателем инфицирования.

Иммуноглобулины класса G (или IgG) выявляют остаточный иммунный процесс. Первое их появление в образце крови приходится на 5-6 неделю болезни. Потом IgG могут присутствовать в течение всей жизни пациента, защищая его от рецидива заболевания и даже полностью исключая вторичное развитие патологий. При выявлении маркеров иммунной системы и аутоиммунных патологических процессах показатели IgG отличаются по своей природе. Например, Igg от Igg4 отличается тем, что первый иммуноглобулин общий, а второй – секреторный.IgE используют только в исследованиях паразитологии.

Иммуноглобулин IgD локализуется в лимфоцитах. В небольшой концентрации его можно обнаружить в крови каждого здорового человека. Количество этого компонента резко возрастает во время вынашивания ребенка, поэтому анализ на ИФА при беременности имеет некоторые отклонения. IgD повышен у больных астмой и людей с иммунодефицитом.

Проведение диагностики

Материалом для проведения ИФА служит венозная кровь, которая забирается из локтевой вены пациента. Рекомендуемый объем – 5-10 мл. Как только материал будет взят, его отправляют в диагностическую лабораторию.

Если все правила были соблюдены, то результат предоставят уже на следующий день.

Чтобы результат ИФА был достоверным, врачи настоятельно рекомендуют выполнить следующие правила подготовки:

  1. сдавать анализ на ИФА разрешается только натощак.
  2. последний прием пищи должен произойти за несколько часов до сна (исключить стоит жирные, копченые и мясные продукты).
  3. за несколько суток до визита в лабораторию нужно отказаться от приема препаратов.
  4. перед процедурой нельзя курить или употреблять любой алкоголь.
  5. запрещается накануне сдачи крови изнурять организм физическими нагрузками.

Расшифровка результатов качественного ИФА-метода

В ответе на ИФА по качественному методу возможны два вида результата:

  • отрицательный значит, что антител в собранной порции крови не обнаружено (отсутствие инфекционного процесса);
  • положительный – свидетельствует о выявлении антител (есть высокая вероятность патологического заболевания, вызванного инфекционным возбудителем).

Если изучение образца показало отрицательное значение иммуноглобулинов групп М, G и А, то можно сказать либо об отсутствии недуга, либо о начальной стадии его развития. Такой же результат бывает у пациентов при окончательном выздоровлении, когда прошло уже достаточно большое количество времени.

Повышенный положительный титр IgM при значениях IgA и IgG со знаком «-» свидетельствует о протекании в организме пациента острой фазы инфекционного недуга.Если результат показал положительные значения всех трех видов иммуноглобулина (М, G и А), то это говорит о рецидиве инфекционного недуга, которое находится в острой или хронической фазе развития.

Расшифровка результатов количественного ИФА-метода

Количественный метод определяет концентрации искомых веществ в образце крови. Полученный результат может выражаться в следующих единицах измерения:

  1. ОП – единицы измерения оптической плотности характеризуют уровень концентрации антител в единице объема. Чем она выше, тем больше иммуноглобулинов в биоматериале.
  2. Некоторые из применяемых ИФА-методик предполагают наличие такого показателя как индекс позитивности в анализе. Коэффициент позитивности - это обозначение, аналогичное плотности образца.
  3. Параметры концентрации антител выражаются в миллилитрах, нанограммах (или нг/мл).
  4. В виде присутствующих символов: «-», «+», «?» (+, ++, +++ и более).

Не стоит забывать, что достоверно оценить количество найденных иммуноглобулинов и поставить окончательный диагноз может только опытный врач.Каждая тест-система имеет свои референтные значения. Варианты нормы и варианты патологических отклонений у них различные.

Преимущества метода

  • Удобство и быстрота проведения биохимических реакций для диагностики;
  • Высокий уровень точности и чувствительность метода (составляет не менее 90%);
  • Возможность проведения диагностики даже на самой ранней стадии развития патологических процессов;
  • Уровень стоимости процедуры диагностики делает ее доступной для населения;
  • Возможность отслеживания динамики инфекционного процесса;
  • Абсолютная безопасность и относительная безболезненность;
  • Для получения достоверного результата хватает и минимального объема материала для исследования;
  • Бланк с ответом будет получен в кратчайшие сроки;
  • Существует возможность частичной или полной автоматизации процесса (полный цикл ИФА проводит анализатор лазурит).

Единственным недостатком считается то, что ИФА относится к непрямым видам диагностики.

То есть, дает возможность определить только иммунный ответ человеческого организма на наличие возбудителя, а не самого возбудителя.



Понравилась статья? Поделить с друзьями:
Adblock detector